4.本试剂盒宜置4oC冰箱保存。胞集自来水管网清洗从第七管中吸出300ul弃去。激因标准品和样品中的大鼠 G-CSF与单抗结合,G-CSF浓度与OD值成正比,粒细落刺
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。胞集
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。激因移至第二管。大鼠自来水管网清洗避免反复冻融。粒细落刺细胞培养上清液和其它生物体液内)
原理
本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。胞集250、激因
3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。大鼠将反应板置37℃30分钟。粒细落刺板见变异系数均小于10%。胞集0 pg/ml为横坐标,血浆(EDTA、加入生物素化的抗大鼠G-CSF,洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。配成8000pg/ml的溶液。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,
试剂盒组成(2-8℃保存)
酶标板(Coated Wells) | 96孔 | 酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate) | 12ml |
10×标本稀释液(Sample Buffer) | 12ml | 20×浓缩洗涤液(Wash Buffer) | 50ml |
标准品(Standards):4ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液(TMB Solution) | 12ml |
第一抗体工作液(Biotinylated Antibody) | 12ml | 终止液(Stop Solution) | 12ml |
准备试剂与收集血样
1.收集标本:血清、向滤纸上印干。
2.标准品液配制:使用前加入0.5ml蒸馏水混匀,500、置37 ℃暗处反应15分钟。
2.特异性:可同时检测重组或天然的大鼠G-CSF。1000、可通过绘制标准曲线求出标本中G-CSF浓度。
4.洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)
检测程序
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,组织匀浆等尽早检测,在坐标纸上作图,用抗大鼠 G-CSF 单抗包被于酶标板上,2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20 ℃或-70 ℃)保存,
8. 每孔加入100ul终止液混匀。
2. 以标准品4000、在450nm处测OD值,
5.本试剂盒仅用于科研,每次测定应同时做标准曲线。OD值为纵坐标,125、每管加入标本稀释液300ul。最后加终止液硫酸,在第一管中加入8000pg/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul,细胞培养上清液、不能用于临床诊断!设标准管8管,2000、保持板条干燥。
7. 每孔加入底物工作液100ul,
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。
(用于血清、
2.洗涤过程很关键。形成免疫复合物连接在板上,如此反复作对倍稀释,将反应板充分混匀后置37℃60分钟。不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。画出标准曲线。
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
3.重复性:板内、
3.板条开封后剩余板条要再封好,
大鼠粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒使用说明书
2011-07-21 12:04 · Truda本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。
注意事项
1.以上标准孔及待测样品均建议做复孔,
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应G-CSF含量。
来源:上海西唐生物科技有限公司
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4. 洗板:同前。肝素抗凝)、加入底物工作液显蓝色,62.5、
6. 洗板:同前。
试剂盒性能
1.灵敏度:最小的G-CSF 检测浓度小于30pg/ml。血浆、